Sephadex G75yn fath o lenwad hidlo gel gyda pherfformiad da. Fe'i paratoir trwy groeslinio dextran ac epichlorohydrin. Mae'n gel siâp glain gyda llawer iawn o grwpiau hydrocsyl, sy'n hawdd ei chwyddo mewn dŵr ac hydoddiannau electrolyt. Terfyn gwahardd uchaf y cyfansoddyn hwn yw 80000, ac mae'r radd chwyddo benodol yn dibynnu ar faint o resin sych ac amodau gweithredu. Er enghraifft, o dan rai amodau, gall gradd chwyddo'r resin sych fod yn 519ml/g. Pan fydd yr ystod pH gweithredu yn 6.210 (5.210 ar gyfer rhai cynhyrchion), gall y cyfansoddyn aros yn sefydlog. Argymhellir ei storio ar dymheredd yr ystafell, oeri ac i ffwrdd o olau yn yr ystod tymheredd o 430 gradd (neu 425 gradd) i gynnal ei berfformiad a'i sefydlogrwydd. Mae'r sylwedd hwn yn arbennig o addas ar gyfer biomoleciwlau mawr gyda phwysau moleciwlaidd sy'n fwy na 80000. Defnyddir yn bennaf ar gyfer dihalwyno a byffer ailosod biomoleciwlau mor fawr. Trwy weithrediad cam un -, mae'n bosibl dihalwyno, tynnu llygryddion yn gyflym, a throsglwyddo moleciwlau i ddatrysiad byffer newydd. Yn ogystal â dihalwyno ac amnewid byffer, mae Sephadex G-75 hefyd yn addas ar gyfer y broses buro biomoleciwlau mawr.
 |
 |
Sephadex G75yn gel dextran, a ddefnyddir yn bennaf ar gyfer y dechnoleg gwahanu a phuro mewn biocemeg a bioleg foleciwlaidd. Mae prif ddefnyddiau'r sylwedd hwn fel a ganlyn:
Yn y broses dihalwyno, gall dynnu halwynau yn effeithiol (halwynau anorganig moleciwl bach fel arfer) o doddiannau moleciwlaidd biolegol. Mantais y sylwedd hwn yw ei bod yn hawdd gweithredu, yn gyflym, a gall gyflawni dihalwyno effeithiol heb newid gweithgaredd biomoleciwlau. Yn ogystal, oherwydd ei sefydlogrwydd cemegol rhagorol a'i biocompatibility, mae'n addas ar gyfer trin dihalwyno biomoleciwlau amrywiol, gan gynnwys proteinau, peptidau, asidau niwclëig, ac ati. Mewn cymwysiadau ymarferol, mae dihalwyno gel fel arfer yn cael ei gyfuno â thechnolegau puro eraill fel cyfnewid bio -ïon, puredigaeth a phuredigaeth, ac ati., Ac ati.
Mae gan y sylwedd hwn ystod eang o gymwysiadau wrth amnewid clustogi, yn enwedig ym meysydd biocemeg a bioleg foleciwlaidd. Er enghraifft, yn y broses o buro protein, weithiau mae angen trosglwyddo proteinau o un system byffer i system byffer arall sy'n fwy addas ar gyfer eu sefydlogrwydd a'u gweithgaredd. A gall y sylwedd hwn gyflawni'r nod hwn yn effeithiol; Yn y broses o echdynnu asid niwclëig, mae hefyd yn angenrheidiol gwahanu'r asid niwclëig o'r toddiant sy'n cynnwys amhureddau a halwynau, a'i drosglwyddo i byffer newydd ar gyfer gweithrediadau dilynol. Mae hefyd yn berthnasol i'r senario hwn; Yn ystod diwylliant celloedd, weithiau mae'n angenrheidiol disodli'r cyfrwng diwylliant neu'r byffer i gynnal twf a gweithgaredd celloedd. Gellir ei ddefnyddio i dynnu sylweddau niweidiol o hen gyfryngau diwylliant neu byfferau a chyflwyno cyfryngau diwylliant newydd neu byfferau.
Gwrthod Moleciwlaidd
Mewn prosesau ymchwil a pharatoi protein, fel rheol mae angen gwahanu proteinau targed oddi wrth gymysgeddau cymhleth. Gall wahanu proteinau yn seiliedig ar eu maint, a thrwy hynny gyflawni puro protein. Trwy addasu'r amodau elution, megis cryfder ïon a gwerth pH yr elifiant, gellir optimeiddio effeithlonrwydd gwahanu proteinau ymhellach. Yn ogystal â phroteinau ac asidau niwclëig, gellir ei ddefnyddio hefyd ar gyfer gwahanu a phuro biomoleciwlau eraill, megis polysacaridau, ensymau, gwrthgyrff, ac ati. Mae cyflymder symud y biomacromoleciwlau hyn mewn gel mewn gel yn dibynnu ar eu maint a'u siâp, er mwyn cyflawni gwahaniad effeithiol. Er na ddefnyddir y sylwedd hwn yn uniongyrchol fel offeryn ar gyfer pennu pwysau moleciwlaidd, gall fod yn offeryn ategol wrth bennu pwysau moleciwlaidd.
Yn y broses o buro protein, fel rheol mae angen cael gwared ar amhureddau moleciwl bach fel halwynau, metabolion moleciwl bach, ligandau heb eu rhwymo, ac ati o'r toddiant protein. Gall y sylwedd hwn gael gwared ar yr amhureddau moleciwl bach hyn yn effeithiol o doddiannau protein, a thrwy hynny wella purdeb proteinau. Mae ei effaith rhidyll moleciwlaidd yn galluogi symud yr amhureddau moleciwl bach hyn yn effeithiol, gan arwain at asidau niwclëig purach. Mae paratoadau ensymau fel arfer yn cynnwys amhureddau moleciwl bach fel swbstradau heb ymateb, atalyddion, metabolion, ac ati. Gall yr amhureddau hyn effeithio ar weithgaredd a sefydlogrwydd ensymau. Trwy hidlo gel y deunydd, gellir tynnu'r amhureddau moleciwlaidd bach hyn yn effeithiol a gellir gwella purdeb paratoi'r ensymau. Yn ogystal â phroteinau ac asidau niwclëig,
Efelychu trosglwyddiad signal rhynggellog
Trosglwyddo signal rhyng -gellog yw mecanwaith rheoleiddio craidd gweithgareddau bywyd, sy'n cynnwys prosesau cymhleth fel adnabod celloedd, trosi signal, ac ymateb ffisiolegol. Mae ymchwil draddodiadol yn aml yn dibynnu ar fodelau celloedd byw, ond mae cyfyngiadau fel rhwydweithiau signal cymhleth a ffactorau sy'n ymyrryd lluosog.Sephadex G75yn gyfrwng hidlo gel dextran clasurol. Mae ei strwythur hydraidd a'i effaith rhidyll moleciwlaidd yn darparu model corfforol unigryw ar gyfer efelychu trosglwyddiad signal rhynggellog.
Model corfforol ar gyfer efelychu trosglwyddiad signal rhynggellog gan ddefnyddio Sephadex G-75
Efelychu cyffyrdd bwlch rhynggellog
Mae Junction Gap yn sianel hydroffilig a ffurfiwyd rhwng celloedd cyfagos trwy gysylltydd, gan ganiatáu ar gyfer cyfnewid moleciwlau bach yn rhydd â phwysau moleciwlaidd<1500 Da. The pore size range of Sephadex G-75 (40-300 μ m) is much larger than that of intercellular junctions (about 1.5 nm), but its porous structure can simulate molecular diffusion processes in local microenvironments. For example:
Ffurfio graddiant moleciwlau signal: Mae crynodiadau gwahanol o foleciwlau signal (fel CAMP, CA ²+) yn cael eu llwytho i'r golofn gel. Gellir gweld gwahaniaeth cyfradd trylediad moleciwlau bach yn y pore gel trwy'r effaith rhidyll moleciwlaidd, a gellir efelychu trosglwyddiad graddiant signalau cemegol rhwng celloedd.
Efelychiad ymateb synergaidd: Mae dau foleciwl sy'n rhyngweithio (fel ligand a derbynnydd) yn cael eu llwytho ar ddau ben y golofn gel yn y drefn honno, a dadansoddir eu cineteg rwymol trwy'r gwahaniaeth amser elution i efelychu'r broses gydnabod moleciwlaidd yn y cyfathrebu cyswllt uniongyrchol rhwng celloedd.
Efelychu cyswllt moleciwlaidd ar wyneb y bilen
Mae'r cyfathrebu rhwng moleciwlau arwyneb pilen yn dibynnu ar ryngweithiadau penodol proteinau wyneb pilen celloedd. Gall Sephadex G-75 efelychu'r broses hon trwy addasu swyddogaethol:
Arbrawf Rhwymo Ligand Derbynnydd: Mae proteinau derbynnydd biotinylated (fel EGFR) yn sefydlog ar wyneb gronynnau gel, mae ligandau fflwroleuol wedi'u labelu (fel EGF) yn cael eu dal trwy'r system biotin streptavidin, ac mae'r dwyster signal rhwymol yn cael ei fonitro gyda chanfod y derbynnydd fflwroleuedd.
Dadansoddiad Rhwymo Cystadleuol: Rhag -lwytho'r cymhleth ligand derbynnydd yn y golofn gel, ychwanegu atalyddion cystadleuol o wahanol grynodiadau (megis gwrthgyrff gwrth EGFR), cyfrifwch y cysonyn atal (Ki) trwy'r newid brig elution, ac efelychu effaith ymyrraeth cyffuriau ar lwybrau signal celloedd.
Efelychu trosglwyddo signal cemegol
Mae trosglwyddiad signal cemegol yn dibynnu ar ymlediad moleciwlau signalau cemegol (fel hormonau a cytocinau) wedi'u secretu gan gelloedd trwy hylifau'r corff neu fatrics allgellog i gelloedd targed. Gall Sephadex G - 75 lunio model trylediad tri dimensiwn:
Mae efelychiad system paracrine: celloedd cyfrinachol (fel macroffagau) a chelloedd targed (fel celloedd T) yn cael eu crynhoi yn y drefn honno mewn microspheres gel, a gwelir statws actifadu celloedd targed (megis mynegiant CD69) trwy ddiwylliant CO i efelychu effaith leol signalau paracrine.
Trosglwyddo signal endocrin: Mae hormonau fflwroleuol wedi'u labelu (fel inswlin) yn cael eu llwytho i'r golofn gel, a dadansoddir eu rhyngweithio â pores gel trwy'r amser elution, ac mae'r hanner - bywyd hormonau mewn cylchrediad gwaed a dosbarthiad organau targed yn cael eu rhagweld gan fodelau mathemategol sy'n ymladd.
Achos Cais Sephadex G-75 mewn ymchwil signalau celloedd
Ymchwil ar drosglwyddiad signal celloedd gwaed coch a swyddogaeth integrin
Y derbynnydd adlyniad platennau integrin IIb 3 yw'r glycoprotein mwyaf niferus ar wyneb y bilen platennau ac mae'n hanfodol ar gyfer ffurfio hemostasis a thrombws. Astudiwch y defnydd o Sephadex G-75 i efelychu'r rhyngweithio rhwng platennau a cholagen subendothelial:
Model Actifadu Integrin: Roedd yr integrin puro IIB 3 wedi'i osod ar wyneb gronynnau gel, ac ychwanegwyd ffibrinogen hydawdd (FG) fel ligand. Canfuwyd y cineteg rwymol gan gyseiniant plasmon wyneb (SPR). Canfuwyd bod affinedd integrin â FG ar ôl actifadu wedi'i wella'n sylweddol (gostyngwyd KD o μ m i NM).
Sgrinio cyffuriau gwrthplatelet: Cymhleth FG integrin rhag -lwytho yn y golofn gel, ychwanegu cyffuriau gwrthplatelet o wahanol grynodiadau (megis Tirofiban), cyfrifwch gyfradd atal cyffuriau ar weithgaredd integrin trwy ddadleoli brig elution, a darparu platfform sgrinio trwybwn - uchel ar gyfer datblygu cyffuriau newydd ar gyfer cyffuriau newydd.
Rheoleiddio llwybrau signalau sy'n gysylltiedig â thiwmor
Mae celloedd tiwmor yn hyrwyddo amlhau a metastasis trwy actifadu llwybrau signalau yn annormal fel MAPK a PI3K/AKT. Gellir defnyddio Sephadex G-75 i ynysu a phuro proteinau allweddol mewn llwybrau signalau:
Ymchwil Llwybr Signal EGFR: Purwyd protein EGFR gan hidlo gel Sephadex G-75, a dadansoddwyd ei statws ffosfforyleiddiad gan sbectrometreg màs. Canfuwyd bod lefel ffosfforyleiddiad safleoedd Y1068 ac Y1086 o EGFR wedi cynyddu'n sylweddol ar ôl ysgogiad EGF, a actifadodd signalau ERK1/2 ac AKT i lawr yr afon.
Dadansoddiad Mecanwaith Gwrthiant Cyffuriau: Mewn cyffur - celloedd canser gastrig gwrthsefyll (SGC7901/VCR), cafodd protein UHRF1 ei ynysu a'i buro gan Sephadex G-75, a chanfuwyd y gall ei or-iselder rwystro actifadu proteinau cysylltiedig ag apoptosis (fel casgenni.
Signalau celloedd imiwn a rheoleiddio polysacarid
Mae polysacaridau algâu coch (BFP) yn gwella ymateb imiwn trwy actifadu'r llwybrau signalau NF - κ B a MAPK mewn macroffagau. Ymchwil ar wahanu a phuro BFP a'i gydrannau (F1, F2, F3) gan ddefnyddio Sephadex G-75:
Polysaccharide component analysis: BFP, F1, F2 and F3 with purity>Cafwyd 95% trwy hidlo gel Sephadex G-75 ynghyd â chromatograffeg cyfnewid ïon cellwlos 52 DEAE, a'u pwysau moleciwlaidd oedd 120 kDa, 85 kDa, 60 kDa a 45 kDa, yn y drefn honno.
Actifadu llwybr signal: Yn y model macrophage RAW264.7, gall BFP a'i gydrannau gymell secretiad NA a TNF - yn sylweddol, ac mae ei fecanwaith yn cynnwys Nf - κ B trawsleoli niwclear a ffosfforyleiddiad jnk, erk, a P3, a P3, a P3, a P3, a P3, a P3, ERK, a P3, ERK, a P3, ERK, A P3, ERK, ERK. Dangosodd y cydrannau wedi'u puro wedi'u gwahanu gan Sephadex G - 75 fod F1 wedi cael yr effaith actifadu gryfaf ar lwybrau Nf - κ B a MAPK (gan gynyddu dim cynhyrchiad 2.5 gwaith a TNF - secretion erbyn 3 gwaith).
Tagiau poblogaidd: Sephadex G75 CAS 37224-29-6, Cyflenwyr, gweithgynhyrchwyr, ffatri, cyfanwerthu, prynu, pris, swmp, ar werth