Aprotinin CAS 9087-70-1

Aprotinin78R2S7, fformiwla moleciwlaidd C284H432N84O, CAS 9087-70-1, Mae'n atalydd proteas a all atal trypsin a chymotrypsin, atal actifadu proteasomau gweithredol eraill yn y pancreas a hunan-actifadu trypsinogen. Defnyddir yn glinigol ar gyfer atal a thrin pancreatitis acíwt, gwaedu a achosir gan ffibrinolysis, a cheulo mewnfasgwlaidd wedi'i ledaenu. Gellir ei ddefnyddio hefyd ar gyfer triniaeth gwrth-sioc. Mae atalyddion proteas yn sylweddau a all rwymo i ensymau a lleihau cyfradd diraddio swbstrad. Mae atalyddion proteas â phriodweddau protein yn bresennol yn eang, ac mae dau fath o atalyddion proteas â phriodweddau protein wedi'u hynysu o ffa soia: atalydd trypsin Kuniz ac atalydd Baumann Bellck. Mae gan y cyntaf bwysau moleciwlaidd o 20-25 ku, tra bod gan yr olaf bwysau moleciwlaidd o 8 ku.

Ailgyfunolaprotinin(RTI16) yn gallu atal kininase a trypsin, ac mae'n atalydd serine protease naturiol nad yw'n benodol. Mae'n brotein sylfaenol cadwyn sengl sy'n cynnwys 58 o weddillion asid amino, gyda 3 bond desulfide wedi'u croesi-yn gysylltiedig â'r gadwyn. Am gyfnod hir, defnyddiwyd aprotinn ar gyfer trin pancreatitis acíwt. Ar ôl y 1990au, dechreuwyd defnyddio aprotin ailgyfunol mewn llawdriniaeth gardiothorasig i amddiffyn platennau, lleihau gwaedu a exudation, ac ar gyfer triniaeth glinigol cleifion ag anhwylderau ceulo. Felly, mae maint marchnad aprotinn wedi ehangu'n gyflym ac wedi dod yn un o'r cyffuriau biocemegol pwysig.

Synthesis

 

Ar hyn o bryd, mae'r paratoadau aprotin ailgyfunol sydd ar gael yn fasnachol yn bennaf yn echdynion o organau fel ysgyfaint buchol, sydd â phrosesau cymhleth a chostau uchel. Felly, mae'n bwysig iawn archwilio'r broses o gynhyrchu aprotin ailgyfunol gan ddefnyddio dulliau peirianneg genetig.

Wrth ddefnyddio system mynegiant secretion, mae cynhyrchu aprotinn yn gyffredinol isel, ac mae gweithgaredd y cynnyrch canlyniadol hefyd yn isel. Trwy fynegiant ymasiad, disgwylir iddo gynyddu lefel mynegiant aprotinn ailgyfunol yn fawr.

 

Adeiladwyd mynegiant aprotinn ailgyfunol plasmid pGrxA BPTI at y diben hwn, a dyluniwyd safle adnabod ar gyfer FXa rhwng y partner ymasiad a'r aprotinn ailgyfunol. Ar ôl cael ei fynegi ar ffurf corff cynhwysiant, cafodd y partner ymasiad ei buro a'i ail-blygu trwy hidlo gel. Cafodd y partner ymasiad ei wahardd gan FXa i gael protein gyda'r un gweithgaredd â'r cynnyrch naturiol. Trwy optimeiddio amodau mynegiant, gwellwyd y cynnyrch yn sylweddol o gymharu â systemau mynegiant blaenorol.

Optimeiddio mynegiant bacteria peirianneg:

 

Brechu bacteria tiwb glyserol ar blatiau agar LB/AMP, meithrin ar 37 gradd am 20 awr, crafu'r cytrefi a'u brechu i mewn i 5 ml o gyfrwng hylif LB/AMP ar 37 gradd , 200 r/munud, a meithriniad dros nos. Brechu 5% o'r inocwlwm i 100 mL o gyfrwng slyri corn, meithriniad ar 37 gradd a 220 r/munud ar ysgydwr, cymell am 7 awr, ac yna centrifuge (8000 r/munud, 5 munud, 4 gradd) i gasglu'r celloedd bacteriol. Pwyswch bwysau gwlyb y celloedd bacteriol a chanfod eu mynegiant 15% SDS-TUDALEN.

Amaethu tanc eplesu

 

Tyfu tanc eplesu:

Gan ddefnyddio tanc eplesu Biostat 30 L Almaeneg, ar 37 gradd, gydag ocsigen toddedig wedi'i reoli ar 20%, pH 7.0. Gan ddefnyddio tanc eplesu i fynegi'r protein ymasiad, cafwyd 260 g o gelloedd bacteriol gwlyb o 16 L o broth eplesu, tua 16 g/L; Mae lefel mynegiant tua 45%,

Torri waliau a chynnwys corff caffael celloedd bacteriol:

 

Ar ôl i'r tyfu gael ei gwblhau, casglwch y celloedd bacteriol, ychwanegwch 1 g o gelloedd bacteriol i 10 mL o hydoddiant A (50 mmol/L Tris HCl, pH 8.0, 1 mmol/L EDTA), ataliwch nhw yn drylwyr, soniwch y celloedd mewn baddon iâ, gweithio am 30 eiliad, egwyl am 10 eiliad, cylchred pŵer 300 W. Trosglwyddwch yr hylif i mewn i diwb centrifuge, centrifuge ar 4 gradd a 8000 r/munud am 15 munud, a'r gwaddod yw'r corff cynhwysiant crai.

Paratoi datrysiad diddymu corff cynhwysiant:

 

Golchwch y corff cynhwysiant crai gyda hydoddiant B (50 mmol/L Tris HCl, pH 8.0, 1 mmol/L EDTA, 1% Triton-X100) ddwywaith, bob tro am 0.5 awr, allgyrchydd i gael gwared ar y supernatant, a chael cyrff cynhwysiant cymharol bur. Ychwanegu 1 g o gyrff cynhwysiant at 5 mL o hydoddiant C (50 mmol/L Tris HCl, pH 8.0, 8 môl/L wrea, 1 mmol/L EDTA, 5 mmol/L DTT), deor dros nos ar 4 gradd, dadnatur a hydoddi, centrifuge ar 12000 r/munud, casglu'r toddiant uwch-lawr ar gyfer cynhwysiant 15. Cael aprotinn ailgyfunol.

Effeithiau ffarmacolegol:

 

 

Aprotininyn atal trypsin dynol, ensym fibrinolytig, plasma, ac angiotensin meinwe trwy gyfadeiladau atalyddion ensymau cildroadwy a ffurfiwyd mewn cymhareb gemegol benodol. Mae proteasau â gweithgaredd serine yn chwarae rhan fawr yn y system kininogen vasopressin kininogen, system ategu, a system geulo, lle mae plasmin a vasopressin plasma yn chwarae rolau hanfodol.

 

Mae aprotinn yn cael ei effaith ataliol trwy ffurfio cymhlyg proteas aprotinn trwy'r gyfran weithredol serine ar yr ensym. Fodd bynnag, o'i gyfuno â gwahanol broteasau, mae'n arddangos cysonion daduniad gwahanol. Y rhwymiad â trypsin yw'r cryfaf (Ki{=0.06nmoN), sef un o'r cysonion isaf a adroddir mewn rhyngweithiadau protein protein (Laydunski et al. 1974). Nid yw'r rhwymiad ag ensym ffibrinolytig dynol yn gryf iawn. Oherwydd gwerth K uchel y cyfadeilad atalydd ensymau (Ki=1 nmoN), gall fod yn wrthdroadwy (Wimann, 1980), ac mae'r cymhlyg sy'n clymu wrth angiotensin plasma dynol yn eithaf gwan (Ki=30 nmol/l), ond yn dal i fod o fewn yr ystod therapiwtig o aprotinn (Nakahara, 1983).

 

Mae aprotinn nid yn unig yn rhwymo i foleciwlau ensymau rhydd, ond hefyd i ensymau sydd eisoes wedi rhwymo i drydedd gydran (os oes gan ganol gweithredol yr ensym allu rhwymo o hyd). Felly, mae aprotinn yn atal ensymau ffibrinolytig rhad ac am ddim a gall hefyd atal y cymhleth cadwyn ffibrinolysin canolradd kinase a ffurfiwyd yn ystod therapi thrombolytig gyda chain kinase (Wimann, 1980).
Mae effaith gwrth-ffibrinolytig aprotinn yn seiliedig ar atal plasmin a weithredir gan hydrolysis protein. Yn wahanol i doddyddion gwrth ffibrinolytig synthetig, oherwydd ei ataliad uniongyrchol o plasmin gorweithredol, mae aprotinn nid yn unig yn amddiffyn y swbstrad uniongyrchol (ffibrin) rhag diraddio gan plasmin, ond hefyd yn amddiffyn ffibrinogen, ffactorau V a VIII mewn plasma, ac alffa 2-globulin mewn serwm.

 

Yn yr arbrofion o sioc a achosir gan endotoxin a sioc hypovolemig, gall Trasylol atal actifadu kininogen yn sylweddol. (Massion et a1.1972).
Gall Trasylol atal neu ohirio datblygiad oedema interstitial pwlmonaidd (ysgyfaint sioc). Mae ei effaith ataliol yn-ddibynnol ar ddos ​​ac amser-(Lorthioir et al., 1973).
Yn ystod sioc, gall pancreas isgemig gynhyrchu sylwedd peptid hynod wenwynig, sef ffactor ataliol myocardaidd (MDF). Mae cysylltiad agos rhwng y ffactor hwn a marwolaeth o sioc.

 

Gellir canfod MDF ym mhlasma llygod, cŵn, mwncïod, a bodau dynol gyda sioc hemorrhagic, septig, cardiogenig, a sioc llosgi. Gall MDF achosi gostyngiad mewn contractility myocardaidd ym mhob achos o waedu, ac ar yr un pryd, mae'n achosi crebachu pibellau ymwrthedd gweledol, gan arwain at isgemia lleol a chynhyrchu mwy o MDF. Ar ben hynny, oherwydd y difrod gwenwynig a achosir i'r system reticuloendothelial, mae oedi wrth ei glirio yn y llif gwaed. Gall Trasylol atal cynhyrchu MDF yn fawr (Lefer 1984).

Aprotinin, fel cyfansoddyn moleciwl bach sy'n gwrthsefyll fibrinolysis, yn arddangos priodweddau ataliol ensymau arwyddocaol a phenodol. Mae nid yn unig yn atal gweithgaredd trypsin yn effeithiol, ond hefyd yn gweithredu'n helaeth ar ensymau proteolytig cysylltiedig eraill, gan chwarae rhan bwysig mewn arbrofion bioleg celloedd. Yn enwedig yn ystod lysis celloedd a meinwe a homogenization, gall Aprotinn wasanaethu fel atalydd protease effeithlon, gan atal dirywiad damweiniol proteinau targed yn effeithiol, sy'n hanfodol ar gyfer cynnal cywirdeb a chywirdeb sampl.

Mae effaith ataliol Aprotinn yn dangos dibyniaeth dos clir, hynny yw, wrth i'w grynodiad gynyddu, mae'r effaith ataliol ar weithgaredd ffibrinolytig hefyd yn cynyddu yn unol â hynny. Mae'r nodwedd hon yn galluogi ymchwilwyr i reoli amodau arbrofol yn fwy cywir i gael canlyniadau arbrofol mwy dibynadwy ac atgynhyrchadwy. Yn y cyfamser, gall Aprotinn hefyd ymestyn amser ceulo gwaed, gan gadarnhau ymhellach ei rôl bwysig yn y mecanwaith ceulo. Mae arbrofion in vitro wedi dangos bod Aprotinn yn atalydd llwybr ceulo mewndarddol effeithiol a all ymyrryd â phrosesau allweddol yn y broses geulo a'u rheoleiddio.

Mae Aprotini hefyd wedi dangos ei effeithiau ffarmacolegol unigryw. Gall atal yn sylweddol y broses o ddiddymu clotiau gwaed in vitro, ymestyn yr amser tocio cynffonau gwaedu mewn llygod mawr, ac ymestyn yr amser ceulo mewn plasma dynol. Mae'r canfyddiadau hyn yn awgrymu y gallai Aprotinn gael effeithiau gwrth-waedu a gwrth-thrombotig posibl. Er mwyn dilysu ei effaith in vivo ymhellach, cynhaliodd ymchwilwyr arbrofion mewn model cylched byr arteriovenous llygod mawr. Dangosodd y canlyniadau y gall Aprotnin leihau pwysau clotiau gwaed yn sylweddol, gan gefnogi ei botensial ymhellach fel cyffur antithrombotig.

I grynhoi, mae Aprotnin, fel cyfansoddyn moleciwl bach sy'n atal ffibrinolysis, wedi dangos priodweddau ataliol ensymau sylweddol ac effeithiau ffarmacolegol in vitro ac in vivo. Mae ei gymhwysiad mewn arbrofion bioleg celloedd yn rhoi offer pwerus i ymchwilwyr, tra bod ei ganfyddiadau mewn astudiaethau in vivo yn darparu cliwiau pwysig a sail ar gyfer ei ddatblygiad fel cyffur gwrth-waedu a gwrth-thrombotig. Yn y dyfodol, gydag ymchwil bellach ar fecanwaith gweithredu Aprotnin a threialon clinigol, disgwylir i ni weld ei gymhwysiad ehangach yn y maes meddygol.

Tagiau poblogaidd: aprotinin cas 9087-70-1, cyflenwyr, gweithgynhyrchwyr, ffatri, cyfanwerthu, prynu, pris, swmp, ar werth