Z-ARG-LEU-ARG-GLY-GLY-AMC CAS 167698-69-3

Fe'i defnyddir yn aml fel swbstrad peptid ar gyfer SARS-CoV PLpro (Syndrom Anadlol Acíwt Difrifol Coronavirus Papaya fel Protease). Mae SARS-CoV yn coronafirws, ac mae ei PLpro yn ensym allweddol yn y broses atgynhyrchu firws, gan gymryd rhan mewn prosesu proteinau polymerig firaol. Felly, mae ganddo werth cymhwysiad pwysig wrth astudio mecanwaith atgynhyrchu SARS-CoV, sgrinio cyffuriau gwrthfeirysol, a datblygu brechlynnau.

Gall hefyd fod yn archwiliwr fflwroleuol ar gyfer delweddu biolegol ac ymchwil lleoleiddio celloedd. Oherwydd presenoldeb y grŵp AMC (amino methyl coumarin), mae'r peptid hwn yn arddangos priodweddau fflworoleuedd a gall allyrru fflworoleuedd o dan gyffro. Mae hyn yn galluogi labelu moleciwlau neu strwythurau penodol mewn celloedd a meinweoedd, a thrwy hynny ddatgelu newidiadau deinamig prosesau biolegol.

Gellir ei ddefnyddio hefyd ar gyfer sgrinio atalydd trwybwn uchel a dadansoddiad parhaus. Yn y broses o ddatblygu cyffuriau, mae'n hanfodol dod o hyd i gyfansoddion a all atal gweithgaredd ensymau neu broteinau penodol yn effeithiol. Fel swbstrad peptid ar gyfer PLpro, gellir ei ddefnyddio ar y cyd ag atalyddion posibl i werthuso eu gweithgaredd trwy fesur newidiadau yng nghyfradd hydrolysis swbstrad. Mae gan y dull hwn fanteision trwybwn uchel, sensitifrwydd uchel, a phenodoldeb uchel, a all gyflymu'r broses sgrinio cyffuriau yn fawr.

Yn ogystal, gellir ei gymhwyso hefyd i ymchwil imiwnolegol. Mae sylweddau peptid yn chwarae rhan bwysig yn y system imiwnedd a gallant gymryd rhan yn yr ymateb imiwn fel antigenau neu wrthgyrff. Gall dilyniant a strwythur penodol Z-ARG-LEU-ARG{5}}GLY-AMC roi imiwnogenigrwydd neu imiwn-adweithedd iddo, gan ei wneud yn addas ar gyfer paratoi gwrthgyrff, brechlynnau, neu adweithyddion imiwnddiagnostig.

Mae PLpro yn gyfrifol am brosesu polyprotein firws a dianc imiwn, ac mae'n darged allweddol ar gyfer cyffuriau gwrthfeirysol. Mae gan Z-LRGG-AMC, fel swbstrad penodol PLpro, effeithlonrwydd holltiad fwy na thair gwaith yn uwch na swbstradau traddodiadol fel Z-Gly-Gly Arg AMC. Wrth sgrinio am gyffuriau, gellir canfod cyffuriau gwrthfeirysol posibl yn gyflym trwy ganfod cyfradd atal cyfansoddion ar holltiad PLpro o Z-LRGG-AMC.

For example, a study used this substrate to screen candidate molecules with inhibition rate>90% o lyfrgell o 100000 o gyfansoddion, gan ddarparu cymorth allweddol ar gyfer datblygu cyffuriau gwrthfeirysol fel remdesivir. Trwy gymharu effeithlonrwydd torri gwahanol fathau o firws PLpro ar Z-LRGG-AMC, gellir datgelu effaith amrywiad firws ar weithgarwch proteas. Er enghraifft, mae cyfradd dorri SARS-CoV-2 PLpro ar Z-LRGG-AMC 1.5 gwaith yn gyflymach na chyfradd SARS-CoV PLpro, sy'n awgrymu y gallai fod ganddo allu rheoleiddio imiwnedd gwesteiwr cryfach.

Mae IPaseT a DUBs eraill yn rheoleiddio diraddiad protein trwy hollti'r dilyniant terfynell C-o ubiquitin. Mae Z-LRGG-AMC yn efelychu strwythur terfynell C-ubiquitin, gyda gwerth kcat/Km o 18 M ⁻¹ s ⁻¹, gan ei wneud yn swbstrad delfrydol ar gyfer astudio cineteg DUB. Er enghraifft, mewn ymchwil canser, gellir gwerthuso'r berthynas rhwng anghydbwysedd homeostasis protein a dilyniant tiwmor trwy ganfod gweithgaredd holltiad DUB ar Z{7}}LRGG-AMC mewn celloedd tiwmor.

Wedi'i gyfuno â thechnoleg trosglwyddo egni cyseiniant fflworoleuedd (FRET), gellir defnyddio Z{0}LRGG-AMC ar gyfer olrhain prosesau addasu hollbresennol mewngellol mewn amser real. Er enghraifft, mewn model clefyd niwroddirywiol, mae canfod lefel yubiquitination alffa synuclein yn datgelu'r cysylltiad rhwng ei agregu a chamweithrediad proteasom.

Mewn plât 384 ffynnon, roedd Z-LRGG-AMC wedi'i gymysgu â'r cyfansoddyn prawf a chafodd atalyddion ensymau eu sgrinio'n gyflym gan newidiadau i'r signal fflworoleuedd. Mae gan y dull hwn trwybwn uchel (gall sgrinio miloedd o gyfansoddion y dydd) a chost isel (cost mandwll sengl<0.1 USD), and has become a standard process for drug development. By changing the substrate concentration, the Km (Michaelis constant) and Vmax (maximum reaction rate) of the enzyme on Z-LRGG-AMC were determined, providing a theoretical basis for inhibitor design. For example, a study used this substrate to determine a Km value of 12 μ M for PLpro, providing key data for optimizing inhibitor affinity.